Бактериологический метод изучения микроорганизмов. Принципы и методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
Бактериологический метод диагностики
1 этап: Забор исследуемого материала для диагостики
2 этап: Получение изолированных колоний, в связи с чем проходит посев на питательные среды методом разобщения
3 этап: Изучение культуральных и морфологических свойств изолированных колоний.
Чистой культурой называется популяция бактерий од ного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде.
Колония представляет собой видимое изолированное скоп ление особей одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей мор фологии, цвету и другим признакам.
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагно стических исследований — идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимиче ских и других признаков микроорганизма.
Методы выделения чистых культур бакте рий.
Универсальным инструментом для производства посевов явля ется бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом при меняют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пасте ровские и градуированные пипетки. Первые предварительно из готовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец ка пилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец за крывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая дру гими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной ма териал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней ча сти среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают, указывая дату посева и характер посевного мате риала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, пет лей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горел ки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.
Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питатель ной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и пре кращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой си стеме называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивиро вание называется непрерывным, а культура — непрерывной.
Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолирован ные колонии округлой формы с ровными или неровными кра ями (S- и R-формы), различной консистенции и цве та, зависящего от пигмента бактерий. Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питатель ную среду и окрашивают её. Дру гая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в орга нических растворителях. И, нако нец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в органических соединениях.
Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пиг менты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины яв ляются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксидцисмутазой и пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают ан тимикробным, антибиотикоподобным действием.