Распространение микробов в природе. Микрофлора почвы, воды, воздуха, методы ее изучения. Характеристика санитарно-показательных микроорганизмов.
Состав микрофлоры почвы зависит от ее типа и состояния, состава растительности, темпера туры, влажности. В почве живут азотфиксирующие бакте рии, способные усваивать молекулярный азот (Azotobacter,, Mycobacterium.). Почва является местом обитания спорообразуюших палочек родов Bacillus и Closlridium. Патогенные спорообразующие палочки (воз будители сибирской язвы, ботулизма, столб няка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum). Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизенте рии — могут попадать в почву с фекалиями. Обнаружение их в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных. В почве находятся грибы, они участвуют в почвообразовании. Токсинообразующие грибы, попадая в продукты питания – вызывают интоксикацию. Большинство почвен ных микроорганизмов способны развиваться при нейтральном рН, высокой относительной влажности, температуре от 25 до 40С.
Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бактерий – показателей фекального загрязнения. Почвы, с преобладанием санитарно-показательных бакте рий, расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненными фекалиями человека или животных. Присутствие в почве Е. coli и Streptococcus faecalis указы вает на свежее, бактерий родов Citrobacter и Enterobacter – на несвежее, a Clostridium perfringens – на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса – количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1г почвы, перфрингенс-титра – масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общей численно сти сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1г почвы.
Нормативы: чистая почва: коли-титр – 1 и выше; перфрингенс-титр – 0,01 и выше; ОМЧ- 100-1000.
Загрязненная почва: коли-титр – 0,9 – 0,01; перфрингенс-титр – 0,009-0,0001; ОМЧ-1000-100000.
Сильно загрязненная почва: коли-титр – 0,009 и ниже; перфрингенс-титр -0,00009 и ниже; ОМЧ – 10000-4000000.
Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Ми кробное число, коли-титр, перфрингенс-титр почвы.
Общее микробное число определяют глубинным посевом (на плотной среде) Перфрингенс-титр почвы – минимальное количество почвы, в кото ром еще определяются Clostridium perfringens. При фекальном загрязнении почвы клостридии обнаруживают в титре 0,01 г. Определяют перфрингенс-титр глубинным посевом.
Оценка фекального заражения проводится по индексу БГКП – коли-титр(количество БГКП в 1 г почвы).
На свежее фекальное загрязнение указывают: обнаружение эн терококков, большое количество БГКП при отсутствии нитри фицирующих бактерий, относительно высокое со держание вегетативных форм клостридий.
Титр БГКП и перфрингенс-титр для сильно загрязненных почв – 0,009; для чистых почв – коли-титр 1,0; перфрингенс-титр – 0,01.
Микрофлора воды отражает микробный состав почвы, так как микроорганизмы, в основном, попадают в воду с ее частичками. В воде формируются определенные биоцено зы с преобладанием микроорганизмов, адап тировавшихся к условиям местонахождения, освещен ности, степени растворимости кислорода и диоксида углерода, содержания органических и минеральных веществ. В водах пресных водоемов обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдо монады, аэромонады), кокковидные (мик рококки) и извитые. Загрязнение воды органи ческими веществами сопровождается увеличе нием анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов. Микрофлора воды выполняет роль активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые утилизируют ся микроорганизмами. Вместе с сточными водами попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтеро кокки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизен терии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций). Таким образом, вода является фактором передачи возбудителей многих инфек ционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный виб рион, легионеллы). Микрофлора воды океанов и морей также содержит различные микроорганизмы, в том числе светящиеся и галофильные вибрионы, поражающие рыб, при употреблении которых в пищу раз вивается пищевая токсикоинфекция.
Методы санитарно-микробиологического исследования воды.
Загрязненность воды определяется по общей микро бной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — ин дикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте рококк, стафилококки;
На основании количественного выявле ния этих санитарно-показательных бак терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр, титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды — это наименьшее ко личество воды, в котором определяется энтерококк.
К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор фекального за грязнения воды. Другой сходный показатель фекального загрязнения — общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксида-заотрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов. Вместо последнего термина предлагается использовать термин «бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства имеют ин дикаторное значение. К бактериям семейства Enterobacteriaceae относятся грамотрицатель ные, оксидазаотрицательные палочки, расту щие на лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 ча сов; колиформные бактерии (палочки).
При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополни тельное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и на личие определенного количества клостридш перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых споро-образующих бактерий.
Нормативы: ОМЧ не более 100, коли-титр – 333 мл, коли-индекс не более 3.
В соответствии с нормативными докумен тами регламентируются следующие нормати вы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:
1. Общее микробное число воды не должно пре вышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды;
2. Общие колиформные бактерии должны от сутствовать в 100 мл исследуемой воды;
3. Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100 мл исследуемой воды;
4. Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкооб-разующим единицам);
5. Споры сульфитредуцирующих клостридий не должны определяться в 20 мл исследуемой воды;
6. Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.
Кроме того, загрязненность воды оценива ется по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом переда чи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).
Показатели качества воды: микробное число, коли-индекс.
Общее микробное число— коли чество аэробных и факультативно-анаэробных бак терий в 1 мл воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Результат вычисляют путем суммирования среднего ариф метического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов.
ОМЧ не должно превышать 100 микробов в 1 мл. воды.
Коли – индекс – измеряется количеством БГКП, содержащихся в 1 л. исследуемой воды.
Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.
Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл. воды.
Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофа гов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхност ных источников и питьевой воде, в сточных водах. Исследование проводят методом агаровых слоев. При наличии колифагов обра зуются прозрачные бляшки.
Колифаги не должны определяться в 100 мл. воды.
Микробиологический контроль возду ха проводится с помощью методов естест венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для при нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио логический и др.). Импшджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес кий раствор хлорида натрия.
Санитарно-гигиеническое состояние воз духа определяется по следующим микробио логическим показателям:
1. Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) — коли чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выра женное в КОЕ;
2. Индекс санитарно-показательных микро бов— количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями мик рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор ганизмами, передающимися воздушно-капель ным путем. Появление в воздухе спорообразу-ющих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель воз можного антисанитарного состояния.
Для оценки воздуха лечебных учреждений мож но использовать данные из официально рекомен дованных нормативных документов.
Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха.
Возбудители воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями (кокками), постоянно обитаю щими на слизистой оболочке верхних дыха тельных путей, выделяющимися в окружаю щую среду (при кашле, чиханье, разговоре), поэтому в качестве санитарно-показательных бактерий для воздуха закрытых помещений предложены гемолитические стрептококки и золотистые стафилококки.
Грамотрицательные бактерии– в связи с распространением госпитальной инфекции в воздухе больничных помещений.
Определяют наличие дрожжеподобных и плесневых грибов.
По эпидемиологическим показаниям в воздухе определяют наличие сальмонелл, микобактерий, вирусов.
Появление в воздухе спорообразующих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель воз можного антисанитарного состояния.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы (СПМ), по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.
Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специаль ных камер или электронным счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые от погибших бактерий; 2) посевом на питательные среды.
СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно оби тать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.